蔗糖含量試劑盒(蒽酮比色法),微板法

蔗糖含量試劑盒(蒽酮比色法),微板法

蔗糖含量試劑盒(蒽酮比色法),微板法

 蔗糖（sucrose）含量（蒽酮比色法）試劑盒說明書 （貨號：G0506W 微板法 96 樣） 一、產品簡介： 蔗糖是光合作用的主要產物，廣泛分布于植物體內，特別是甜菜、甘蔗和水果中含量*高。蔗糖由葡萄糖和糖脫水縮合形成，易溶于水較難溶于乙醇。 在酸性條件下，將蔗糖水解生成果糖和葡萄糖，采用蒽酮比色法，生成的產物在 620nm 下有特征吸收峰，進而計算出蔗糖的含量。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規格 保存要求 備注 試劑一 液體 1mL×1 支 4℃保存 試劑二 粉劑 mg×2 瓶 4℃保存 標準品 粉劑×1 支 4℃保存 臨用前稱量取出2mg標準品至 一新EP管中，再加2mL蒸餾水 溶解即1mg/mL標準品，再用蒸 餾水稀釋一倍得0.5mg/mL蔗 糖標準品溶液，備用（現配現 用，三天內用完）。 三、所需儀器和用品： 酶標儀、96 孔板、水浴鍋、移液器、研缽、常溫離心機、乙醇、濃硫酸、蒸餾水。 四、蔗糖含量檢測： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 建議：選取樣本做幾個梯度的稀釋，選取適合本次實驗的稀釋倍數 D。 1、樣本制備 ① 組織樣本： 稱取 0.1g 樣本（若是干樣，如烘干煙葉等可取 0.05g；若是水分充足的樣本可取 0.2g）， 先加入 0.8mL 的 80%乙醇（自備：取 80mL 乙醇溶于 20mL 蒸餾水中），冰浴勻漿，倒入 有蓋離心管中，再用 80%乙醇沖洗研缽并轉移至同一 EP 管中，使 EP 管中粗提液終體積 定容為 1.5mL（若用自動研磨機可直接加入 1.5mL 的 80%乙醇研磨）；置 50℃水浴 20min （封口膜纏緊，防止液體散失，且間隔 2min 振蕩混勻一次），冷卻后（若有損失，可加 80%乙醇補齊至 1.5mL），12000rpm，室溫離心 10min，取上清液備用。 ② 液體樣本： 澄清的液體樣本直接檢測，若渾濁則需 12000rpm，室溫離心 10min，取上清液備用。 2、上機檢測： ① 酶標儀預熱 30min 以上，調節波長至 620nm。 ② 調節水浴鍋至 95℃，工作液的配制：臨用前在一瓶試劑二中加入 2.75mL 蒸餾水后， 緩慢加入 7.25mL 濃硫酸，充分溶解（若難溶解，70℃加熱溶解；剩余試劑 4℃保存 一周）。 ③ 上清液稀釋：可先取 2 個樣本預測，確定適合本批樣本的稀釋濃度 D：葉片類樣 本可稀釋 10 倍，含糖量高的果肉類樣本可稀釋 20 倍左右。 ④ 在 EP 管中依次加入： 試劑（μL） 測定管 標準管 （僅做一次） 空白管 （僅做一次） 樣本 20 標準品 20 蒸餾水 20 試劑一 10 10 10 務必混勻（可用槍吸打混勻），95℃煮沸 10min（蓋緊， 防止水分散失） 工作液 180 180 180 混勻，95℃水浴 10min（封口膜纏緊，防止水分散失）， 冷卻至室溫后，取 200μL 轉移至 96 孔板中，于 620nm 讀取吸光值 A，ΔA=A 測定管-A 空白管。 【注】：如果ΔA 大于 1，需要將樣本用蒸餾水稀釋（嚴禁稀釋加熱反應后的混合液， 否則會出現渾濁現象），計算公式中乘以相應稀釋倍數 D。 五、結果計算： 1、按照重量計算： 蔗糖含量(mg/g 重量)=(C 標準×V1)×ΔA÷(A 標準-A 空白)÷(W×V1÷V)×D =0.75×ΔA÷(A 標準-A 空白)÷W×D 2、按照體積計算： 蔗糖含量(mg/mL 液體)=(C 標準×V1)×ΔA÷(A 標準-A 空白)÷V1×D =0.5×ΔA÷(A 標準-A 空白)×D C 標準---蔗糖標準品濃度，0.5mg/mL； D---稀釋倍數，未稀釋即為 1； V---加入提取液體積，1.5mL； V1---加入樣本體積，0.02mL； W---樣本鮮重，g。