果糖含量試劑盒(間ben二酚比色法)微板法

果糖含量試劑盒(間ben二酚比色法)微板法

果糖含量試劑盒(間ben二酚比色法)微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 果糖（fructose）含量（間*二酚法）試劑盒說明書 （貨號：WS5050W 微板法 96 樣） 一、產品簡介： 果糖是一種較為常見的己酮糖，是葡萄糖的同分異構體，以游離狀態大量存在于水果的 漿汁和蜂蜜中。本試劑盒檢測果糖，是通過果糖與間*二酚反應，生成有色物質，在 480nm 下有特征吸收峰，進而求得待檢測樣本果糖含量。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規格 保存要求 備注 試劑一 液體 30 mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 液體 10 mL×1 瓶 4℃保存 標準品 粉劑 mg×1 支 4℃保存 臨用前加1mL蒸餾水溶解， 即 1mg/mL 果糖溶液 三、所需的儀器和用品： 酶標儀、96 孔板、水浴鍋、可調式移液器、研缽、乙醇、蒸餾水。 四、果糖含量的測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 建議：可取兩個樣本做適當梯度的稀釋（如 2-5 倍），確定適合本次實驗的稀釋倍數 D。 1、樣本制備 ① 組織樣本： 稱取 0.1g 樣本（若是干樣，如烘干煙葉等可取 0.05g；若是水分充足的樣本可取 0.2g）， 先加入 0.8mL 的 80%乙醇（自備：取 80mL 乙醇溶于 20mL 蒸餾水中），冰浴勻漿，倒入 有蓋離心管中，再用 80%乙醇沖洗研缽并轉移至同一 EP 管中，使 EP 管中粗提液終體積 定容為 1.5mL（若用自動研磨機可直接加入 1.5mL 的 80%乙醇研磨）；置 50℃水浴 20min （封口膜纏緊，防止液體散失，且間隔 2min 振蕩混勻一次），冷卻后（若有損失，可加 80%乙醇補齊至 1.5mL），12000rpm，室溫離心 10min，取上清液備用。 ② 液體樣本： 澄清的液體樣本直接檢測，若渾濁則需 12000rpm，室溫離心 10min，取上清液備用。 2、 上機檢測 ① 酶標儀預熱 30min 以上，調節波長至 480nm。 ② 在 EP 管中依次加入下列試劑： 試劑（μL） 測定管 標準管 （僅做一次） 空白管 （僅做一次） 樣本 30 標準品 30 蒸餾水 30 試劑一 210 210 210 試劑二 60 60 60 混勻，95℃水浴反應 30min（可用封口膜纏緊，以防止水 分散失），冷卻后取 200μL 至 96 孔板中，在 480nm 分別 讀取吸光值 A，△A=A 測定-A 空白。本試劑盒僅供科研使用 2 【注】：如果ΔA 大于 1，需要將樣本用蒸餾水稀釋，計算公式中乘以相應稀釋倍數 D。 五、結果計算： 1、按照重量計算： 果糖含量（mg/g 重量）=(C 標準×V1)×△A÷(A 標準-A 空白)÷(W×V1÷V)×D =1.5×△A÷(A 標準-A 空白)÷W×D 2、按液體體積計算： 果糖含量（mg /mL 液體）= (C 標準×V1)×△A÷(A 標準-A 空白)÷V1×D =△A÷(A 標準-A 空白)×D C 標準---果糖標準品濃度，1mg/mL； V---加入提取液體積，1.5mL； V1---加入樣本積，0.03mL； W---樣本鮮重，g； D---稀釋倍數。