漆酶(Lac)活性試劑盒,微板法

漆酶(Lac)活性試劑盒,微板法

漆酶(Lac)活性試劑盒,微板法

本試劑盒僅供科研使用

 漆酶（Laccase）試劑盒說明書 

（貨號：WS1450W 微板法 96 樣） 

一、產品簡介： 漆酶（EC 1.10.3.2）是一種含銅的多酚氧化酶，屬于銅藍氧化酶家族，廣泛分布于真菌 和高等植物中，具有較強的氧化還原能力，在紙漿生物漂白，環境污染物降解和木質纖維 素降解以及生物檢測方面有非常廣泛的應用。 漆酶分解底物 ABTS 產生 ABTS 自由基，在 420nm 處的吸光系數遠大于底物 ABTS， 測定 ABTS 自由基的增加速率，可計算得漆酶活性。 二、試劑盒組分與配制 試劑名稱 規格 保存要求 備注 提取液 液體 100mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 液體 12mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 粉劑×1 瓶 4℃保存 臨用前甩幾下，使粉劑落到底部， 再加 5.5mL 蒸餾水充分溶解，4℃ 保存一周，若變色則不能使用。 三、所需的儀器和用品： 酶標儀、96 孔板、可調式移液器、天平、低溫離心機、恒溫水浴鍋。 四、漆酶活性檢測： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備 ① 組織樣本： 稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液，進行冰浴勻漿。12000rpm，4℃離心 10min，取 上清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進行提取 ② 細菌/細胞樣本： 先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；取 500 萬細胞加入 1mL 提取液，冰 浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；12000rpm，4℃ 離心 10min，取上清置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照細菌/細胞數量（104）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本：直接檢測。若渾濁，離心后取上清檢測。 2、上機檢測： ① 酶標儀預熱 30min 以上，調節波長至 420nm。 ② 在 96 孔板中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 樣本 30 試劑一 120 試劑二 50 25℃，立即于 420nm 處讀取吸光值 A1， 反應 5min 后讀取 A2，△A=A2-A1。 【注】若△A 差值較小，可增加樣本量 V1（如由 30μL 增至 60μL，則試劑一相應減少） 或延長反應時間 T（如由 5min 增至 15min），則改變后的樣本體積 V1 和反應 時間 T 則代入計算公式重新計算。本試劑盒僅供科研使用 2 五、結果計算： 1．按照蛋白濃度計算: 酶活定義：每毫克蛋白每分鐘氧化 1nmol 底物 ABTS 所需的酶量為一個酶活力單位。 漆酶活性(nmol/min/mg prot)=[△A÷(ε×d)×V2×109]÷(V1×Cpr)÷T=74.07×△A÷Cpr 2．按照樣本質量計算: 酶活定義：每克樣品每分鐘氧化 1nmol 底物 ABTS 所需的酶量為一個酶活力單位。 漆酶活性(nmol/min/g 鮮重)=[△A÷(ε×d)×V2×109]÷(W×V1÷V)÷T=74.07×△A÷W 3．按照細胞數量計算: 酶活定義：每 104個細胞每分鐘氧化 1nmol 底物 ABTS 所需的酶量為一個酶活力單位。 漆酶活性(nmol/min/104 cell)=[△A÷(ε×d)×V2×109]÷(細胞數量×V1÷V)÷T =74.07×△A÷細胞數量 4．按照液體體積計算: 酶活定義：每毫升液體每分鐘氧化 1nmol 底物 ABTS 所需的酶量為一個酶活力單位。 漆酶活性(nmol/min/mL)=[△A÷(ε×d)×V2×109]÷V1÷T=74.07×△A ε---ABTS 摩爾消光系數：36×103L/mol/cm； d---96 孔板光徑，0.5cm； V2---反應總體積，0.2mL=2×10-4L； V1---反應中樣本體積，0.03mL； V---加入提取液體積，1mL； W---樣本質量，g； T---反應時間，5min； Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；建議使用本公司的 BCA 蛋白含量檢測試劑盒。